对培养出的菌落可用氧化酶试验、硝酸盐恢复试验、对辅酶和氯化血红素等试验，依据区分须要加以鉴定；也可用过氧化氢酶、吲哚、尿素酶、糖的利用试验等加以鉴定。对菌珠进行鉴定是诊治所必须的。有些不具有条件的实验室，一觉察有细菌生长即诊治本病，是不科学的，下面让性疾病专家来揭秘软下疳的诊治秘密。
　　（一）诊治软下疳的必备条件
　　普通讲，诊治软下疳要尤其谨慎，由于当前本病并不常见，但是如合乎如下条件者可以作出诊治。
　　（1）发病前有不洁性交史。
　　（2）男女及尿道口出现一个或更多的溃疡，基底软，有疼痛与触痛。
　　（3）单侧腹股沟横痃，疼痛，溃疡排脓。
　　（4）暗视野检测螺旋体阴性。
　　（5）涂片作姬姆萨染色查不到多诺万小体（由日本人宫川觉察的一种招致性病性淋巴肉芽肿的致病毒）。
　　（6）梅毒血清试验阴性。
　　（7）革兰氏染色，可查到阴性链球菌，但可产生假阳性，有条件者可作细菌培养。
　　（二）诊治软下疳的实验室检测
　　由于本病当前属于少发性性病，诊治软下疳应尤其慎重。必要的实验室检测是诊治软下疳的关键。最简单的实验步骤是革兰氏染色涂片。有条件的应作细菌培养和组织病理检测。
　　1、涂片检测
　　从溃疡处取材作涂片时，由于脓性分泌物中的杂菌易使结果混淆，故应先将溃疡清洗洁净，涂片可用革兰氏染色或姬姆萨染色。杜克雷菌在涂片中为短小（2m）的呈平行直线排列的二极染色菌，革兰氏染色阴性。如果有典型的病症，实验室又能查到杜克雷菌，本病即可诊治。
　　2、细菌培养
　　常用的培养基有淋球菌胎牛血清琼脂、巧克力马血琼脂，取标本时应将溃疡外表的痂皮和碎屑去掉，用灭菌拭子采取分泌物和溃疡的基底部物质。将标本接种于平皿上，划线分离。平皿放入5～10二氧化碳和饱和湿度的环境中，于33～35至少培养48小时看结果。杜克雷菌的菌落较小，如针尖大小，光滑，呈半球形。但菌落常呈区分的形状，可呈半透明状、浅灰色和肤黄色等。菌落的特征是紧密，如用接种环触之，几乎整个菌落在培养基上滑动。
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